分光光度法檢測(cè)數(shù)據(jù)不穩(wěn)定的原因？使用分光光度法會(huì)有哪些影響數(shù)值的因素？

分光光度法的基本定律是朗伯一比爾定律(Lambert-Beer law)，是描述物質(zhì)對(duì)某一波長(zhǎng)光吸收的強(qiáng)弱與吸光物質(zhì)的濃度及其液層厚度間的關(guān)系。

公式意義：

比爾-朗伯定律數(shù)學(xué)表達(dá)式：A=lg(1/T)=Kbc

A為吸光度,T為透射比(透光度),是出射光強(qiáng)度(I)比入射光強(qiáng)度(I0).

K為摩爾吸收系數(shù).它與吸收物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波長(zhǎng)λ有關(guān).

c為吸光物質(zhì)的濃度，b為吸收層厚度.【b也常用L替換，含義一致】

物理意義：

當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí),其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比，而透光度T與c、b成反比。

偏離原因（實(shí)踐：檢測(cè)不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定的原因）

在分光光度分析中，比爾定律是一個(gè)有限的定律，其成立條件是待測(cè)物為均一的稀溶液、氣體等，無溶質(zhì)、溶劑及懸濁物引起的散射;入射光為單色平行光。導(dǎo)致偏離朗伯-比爾定律的原因很多，但基本上可分為物理和化學(xué)兩個(gè)方面。物理方面主要是入射光的單色性不純所造成的;化學(xué)方面主要是由于溶液本身化學(xué)變化造成的。

單色光不純引起的偏離

嚴(yán)格說來，朗伯-比爾定律只適用于單色光。但由于儀器分辨能力所限，入射光實(shí)際為一很窄波段的譜帶。由于分光光度計(jì)分光系統(tǒng)中的色散元件分光能力差，即在工作波長(zhǎng)附近或多或少含有其他雜色光，雜散光(非吸收光)也會(huì)對(duì)比爾定律產(chǎn)生影響，這些雜色光將導(dǎo)致朗伯-比爾定律的偏離。

實(shí)際上，理論上的單色光是不存在的，我們所做的只能是讓入射光的光譜帶寬盡可能的小，要盡可能的靠近單色光。

溶液性質(zhì)引起的偏離

樣品溶液濃度的影響

比爾定律是一個(gè)有限的定律，它只適用于濃度小于0.01mol/L的稀溶液。因?yàn)闈舛雀邥r(shí)，吸光粒子間的平均距離減小，受粒子間電荷分布相互作用的影響，他們的摩爾吸收系數(shù)發(fā)生改變，導(dǎo)致偏離比爾定律。因此，待測(cè)溶液的濃度應(yīng)該控制在0.01mol/L以下。

溶質(zhì)和溶劑的性質(zhì)

例如，碘在四氯化碳溶液中呈紫色，在乙醇中呈棕色，在四氯化碳溶液中即使含有1%乙醇也會(huì)使碘溶液的吸收曲線形狀發(fā)生變化。這是由于溶質(zhì)和溶劑的作用，生色團(tuán)和助色團(tuán)也發(fā)生相應(yīng)的變化，使吸收光譜的波長(zhǎng)向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)或向短波長(zhǎng)方向移動(dòng)，即所謂的紅移和藍(lán)移。

介質(zhì)不均勻性

實(shí)踐：檢測(cè)甲醛樣本的時(shí)候就要觀察所檢樣本中有沒有雜質(zhì)，顏色有沒有不均勻，有沒有分層。

朗伯-比爾定律是適用于均勻、非散射的溶液的一般規(guī)律，如果被測(cè)試液不均勻，是膠體溶液、乳濁液或懸浮液，則入射光通過溶液后，除了一部分被試液吸收，還會(huì)有反射、散射使光損失，導(dǎo)致透光率減小，使透射比減小，使實(shí)際測(cè)量吸光度增大，使標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離直線向吸光度軸彎曲，造成對(duì)朗伯-比爾定律的偏離。

溶質(zhì)的變化

比爾定律在有化學(xué)因素影響時(shí)不成立。解離、締合、生成絡(luò)合物或溶劑化等會(huì)對(duì)比爾定律產(chǎn)生偏離。離解是偏離朗伯-比爾定律的主要化學(xué)因素。溶液濃度的改變，離解程度也會(huì)發(fā)生變化，吸光度與濃度的比例關(guān)系便發(fā)生變化，導(dǎo)致偏離朗伯-比爾定律。 

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